КАМЕРЫ СЧЕТНЫЕ
Спасибо нашим инвесторам из казино онлайн
КАМЕРЫ СЧЕТНЫЕ
, приспособление, позволяющее производить подсчет форменных элементов крови и спинномозговой жидкости, бактерий и пр. Все К. с. представляют толстое предметное стекло, посередине которого находится углубление, имеющее во всех своих частях одинаковую глубину— 0,1
мм,
в нек-рых К. с.—0,2
мм
(см. ниже). На дне этого углубления выгравирована сетка, разделенная на квадратики определенной площади (обычно V^o
мм*).
Капля исследуемой жидкости, разбавленная соотв. образом, наносится в углубление, и, т. к. объем жидкости над каждым квадратиком точно известен, из числа форменных элементов в одном квадратике легко вычислить их количество в 1
мм3.
Одной из наиболее употребительных К. для счета форменных элементов крови является камера Тома-Цейс с а (Thoma-Zeiss). Устройство ее состоит в след.: на предметном стекле приклеена квадратная стеклянная пластинка, имеющая посередине круглое отверстие. В этом отверстии приклеена к предметному стеклу круглая пластинка,’ снабженная сеткой (рис. 1). Эта пластинка на 0,1
мм
тоньше квадратной пластинки. Т. о. если отверстие в пластинке закрыть покровным стеклом, то расстояние между нижней поверхностью покровного стекла и круглой пластинкой будет равняться 0,1
мм.
Между пластинками имеется круглый жолобок, необходимый для того, чтобы излишек жидкости поместился в К. Взаимно перпендикулярные
линии сетки расположены на расстоянии 1/голш°Дна от другой и образуют так. обр. квадратики площадью в 1/400 лш2. Каждая четвертая линия является тройной. Пересечением этих тройных линий образуются поля, содержащие 16 мелких квадратиков. Длина стороны большого квадрата=0,2 мм (V20x4), а площадь=V25 мм*. Всего в этой сетке 16 больших полей. Несовершенство камеры Тома заключается в следующем: наполнение ее кровью производится до наложения предметного стекла. Поэтому К. может или быть не вполне наполненной, и тогда глубина слоя крови будет меньше 0,1 мм, или капля будет выступать из К., и тогда точная пришлифовка покровного стеклышка будет затруднена. Сетка камеры Тома
Рисунок 2.
устроена так, что крупные квадраты неотчетливо отделены от мелких и количество этих полей ограничено. Недостатки самой камеры Тома устранены в камере Бюркера (Burcker), а вместо сетки Тома предложен ряд других сеток. К. Бюркера. В этой К. на предметном стекле (рис. 2) укреплены две продолговатые опорные пластины
Б,
а между ними приклеены две счетные, снабженные сеткой (рис. 4) пластинки
А,
к-рые, как и в К. Тома, на 0,1
мм
тоньше пластинок
Б.
Счетные пластинки разделены жолобом, а их округленные наружные концы, как видно из рисунка, выступают за концы пластинок
Б.
Когда к пластинкам
Б
плотно притерто покровное стекло, то концы счетных пластинок выступают из-под покровного стекла наружу. Если теперь нанести на этот выступающий конец счетной пластинки каплю разведенной крови, то вследствие капилярности кровь сразу всосется в пространство между покровным стеклом и счетной пластинкой, т. е. точно займет пространство, имеющее 0,1
мм
глубины. В этом, а также в возможности производить благодаря наличию как бы двух К. контрольное определение, и заключается большое преимущество К. Бюркера. К. Бюркера бывает снабжена различными сетками, устройство которых видно из рисунка 4.—С етка Тюрка Г»
«ГШШШИ
||| Г~
11 § t^iTullMiiJLi
= == |Ц
llllilllllllll J Рисунок
3.
(Tilrck; рисунок 3) является видоизменением сетки Тома, т. к. ее центральная часть идентична с сеткой Тома; но расходящиеся от этой части крестом полосы снабжены только полями (большими квадратами), а 4 угла этой сетки совершенно идентичны с сеткой ■ Бюркера (в каждом углу по 16 больших квадратов). Общая площадь сетки Тюр-ка=9 дм8. Сетка Бюркера (рисунок 4) представляет 9 квадратных полей, образованных пересечением двойных, Рис 4& линий. Каждое такое поле содержит 16 больших квадратов, имеющих площадь в Vss ж»8, а пересечение двойных линий дает малые квадраты (Vwo-W-w2)- Общая площадь сетки Бюркера=9
мм2.
— Сетка Предтеченского (рисунок5)разделена взаимно перпендикулярными полосами из 5 параллельных линий с расстоянием между полосами в Vs л**- Расстояние между 5 отдельными линиями, образующими полосу, равно Vao
мм.
Т. о. пересечение линий дает 16 квадратиков площадью в
1/юо мм2,
а пересечение полос из 5 линий дает поля. Общая площадь этой сети=4
ммг.
Jfl-I fll ^gMjfegjj|=f=%
Нусбаумом
~f|
ШГЦ ~
If Т
ГТ»
предложена сет – Д^рЛрМ =
Лр=||=
== ка, отличающая – ТЕ
Т
ГI j I
|jij
|
~||fl~
I
Z
ся от сетки Тюрка – Jg
J
Lg j =gJE31=== тем, что ее боко –
Т
г~
|Ц~
~ГТ»"
Т|
вые части разде – ДЬ
~||Ь
=1=
Н1г^1
=== лены не двойны –
Ч
Ш Ш
Г~*
1
Г
Т|
ми, а одиночными
_Ц|
_.-
||Ц
= J =
=ffb =§}
=== линиями. Видоиз –
Т
г
Т
}! ^pF И==~ менения всех се – ||| |,|||| 1_[ —Щ-^flfl- ток имеют целью дать возможность& Рисунок 5. счета в возможно большем числе квадратов й наиболее резко отделить большие квадраты от малых. Делается это потрму, что ограничиться счетом форменных элементов в нескольких квадратах нельзя. Объем крови в каждом поле равен V250 л»*8 (VsiXVio)- Для счета эритроцитов кровь разводится в 100 или 200 раз.
Рисунок 6.
Для того чтобы узнать число эритроцитов в 1
мм3,
надо умножить их число в одном большом квадрате на 25.000 (при разведении в 100 раз) или на 50.000 (при разведении в 200 раз); т. о. ошибка увеличивается во столько же раз. Поэтому необходимо производить подсчет в большем числе квадратов и перечислять на 1 лж8 лишь среднее, полученное из большого количества не особенно расходящихся между собой цифр. Так как лейкоцитов в крови по сравнению с эритроцитами очень немного, их счет можно вести только в больших квадратах (полях); отсюда важность удобного для счета расположения больших полей в сетках. Эритроциты всегда считаются во всех 16 малых квадратах. Поэтому удобно, когда малые квадраты собраны в группы, как это имеет место в камерах Тюрка, Предтеченского и Нусбаума. Общие методические указания (см. также
Кровь).
Кровь для счета форменных элементов необходимо разбавлять, иначе форменные элементы налегают друг на друга; разбавление достигается употреблением смесителя (рис. 6). Нижний конец смесителя вытянут в капи-ляр, на верхний конец надета трубка, через к-рую кровь всасывается до метки. Посередине имеется расширение, внутри к-рого помещен стеклянный шарик. Кровь всасывается до метки
0,5
(посередине капиляра) или до метки
1
и затем сразу разбавляется разводящей жидкостью. Следует осте- регаться свертывания крови в капиляре. Для счета эритроцитов берут смеситель, объем ампулы к-рого (до метки
101)
в 100 раз больше объема капиляра до метки
1,
а для счета лейкоцитов—смеситель с ампулой, объем к-рой в 10 раз больше объема капиляра. Т. о. можно брать разбавление в 100 и 200 (если брать кровь до метки
0,5)
раз или соответственно для лейкоцитов в 10 и 20 раз. (Окраску лейкоцитов, состав разбавляющих жидкостей и способ взятия крови — см.
Кровь.)
После смешивания и встряхивания крови с разбавляющей жидкостью из смесителя выдуваются 1—2 капли чистого растворителя, остававшегося в капиляре, и затем капля разбавленной крови переносится на К. с. Покровное стекло и в К. Тома и в К. Бюркера (в последней—предварительно) должно быть идеально притерто к опорной пластинке. Точность притирки узнается по появлению разноцветных, т. н. Ньютоновых колец между покровным стеклом и опорной пластинкой. Подсчет производится, как сказано, в ряде квадратов под микроскопом при среднем увеличении (250). У микроскопов Цейсса удобен объектив С, у Рейхерта—6 Ь, у Лейца — 5. Соответствующие окуляры—3 (Цейсе), 2 (Рей-херт), 2 — 4 (Лейц). Диафрагма микроскопа суживается. Весьма удобен вращающийся столик. Покровные стекла 0,3—0,5
мм.
—Т ехника счета. Во избежание повторного сосчитывания одного и того же шарика берут за правило считать те форменные элементы, к-рые лежат на. верхней и левой черте данного квадратика, и не считать тех, которые лежат на его правой и нижней черте. Понятно, что эти элементы будут тогда сосчитаны при счете в квадратике, прилегающем снизу или справа. Перечисление на 1
мм3
происходит следующим образом: если в одном большом квадрате (заключающем в себе 16 малых квадратиков) содержится
А
эритроцитов, то в 1
мм3
их содержится 25.0004 при разведении в 100 раз и 50.000 А при разведении в 200 раз
TZTTZS™— – iL^.
nPffifff
—~===z
iiliiSili! (для лейкоцитов соответственно 2.500
А
и 5.000J.). Это понятно из того, что объем каждого большого квадрата = Yssd
mms,
a объем малого квадрата равен 1/4ооо
мм3.
Площадь квадратика и глубина К. с. выгравированы на всех К. При счете лейкоцитов во всей камере принимается во внимание общая площадь сетки; так, если во всей камере Бюркера сосчитано JV лейкоцитов, то в 1
mms: х
= У-:1°’20,так как площадь всей сетки Бюркера = 9
мм’1,
а ее объем = 0,9
мм3;
разведение—в 20 раз. В заключение нужно отметить необходимость абсол. чистоты как К., так и смесителя (моются последовательно ВОДОЙ, Спиртом И Эфиром). Г. Копрадя. Кроме оригинальных камер Тома-Цейсса и Бюркера существует ряд их видоизменений, заключающихся гл. обр. в увеличении площади сетки, что важно при счете лейкоцитов.—В и д о – изменения камеры Тома-Цейсса. К. с. Цапперта (Zap-pert; рисунок 7)— площадь сетки в 9 раз больше, чем в камере Тома-Цейсса; каждая сторона прямоугольника равна 3
мм.
Сетка представляет в середине сетку Тома-Цейсса, в стороны отходят продолжения этих линий, образуя еще 8 квадратов, равных по величине центральному квадрату. К. с. Эльцголь-ц a (Elzholz)—дальнейшее усовершенствование предыдущей сетки (рис. 8). Угловые квадраты разделены добавочными двойными линиями, чем облегчается счет лейкоцитов. Глубина обеих последних камер — 0,1
мм.
Видоизменения камеры Бюркера
. К. с. Ключарев а—представляет собой камеру Бюркера с сеткой Предте-ченского (рис. 5). К. с. Г о р я е в а—то же, что и предыдущая, с расширенной сеткой Предтеченско-го.—К. с. Г о р я-ева-Паппен-гейма (Рарреп-heim) представляет собой камеру Бюркера с сеткой Го-ряева – Паппенгей-ма (рис. 9). В этой сетке, напоминающей сетку Предте-ченского, для облегчения счета лейкоцитов уменьшена величина неразделенных нием добавочных линий. больших квадратов, как Рисунок Т.
=
р
=
и
=
=
т
Ж^
т
^3
ы
Рисунок 8. квадратов введе-Общее количество и в сетке Пред-теченского, равняется 100, количество больших квадратов, разделенных на 16 маленьких, уменьшено до 16; количество больших неразделенных квадратов увеличено до 36. Общая площадь сетки и глубина, как в камере Ключарева. Кроме вышеописанных двух основных типов К. с, существуют более усовершенствованные камеры из сплошного стекла, чем уничтожается возможность отклеивания счетной пластинки и изменения вида сетки при подсыхании приклеивающего ее бальзама. К таковым относятся: К. счетная Леви (Levy); сделана из цельного стекла по типу открытой каме-ры Бюркера с одинарной (рис. 10) или двойной -(рис. 11 и 12) сеткой Тюрка (рис. 3) или Нейбауера (Neu-bauer) (рисунок 13). Последняя напоминает сетку Тюрка, но крайние квадраты в ней разделены не двойными, а одинарными линиями. Наполнение камеры производится после наложения покровного стекла; капля всасывается в камеру в силу капилярности, как в камере Бюркера. Общая поверхность сетки—9
мм1,
глубина камеры—0,1
мм.
—Сетка Нейбауера очень удобна, употребляется Рисунок 9.
Рисунок 10.
в камерах и других систем. Выпущена фирмами Цейсса и Лейтца.—К. с. Гаусера (Hausser; рис. 14) состоит из двух частей: 1) стеклянной, представляющей предметное стекло с камерой, аналогичной камере Леви, но значительно меньшей величины (рис. 15 и 16), и 2) футляра, в к-рый вкладывается стеклянная часть (рис. 17). Особые зажимы (рисунок 18) фиксируют покровное стекло к
Рисунок п.
предметному. В камере Гаусера применяются сетки Тюрка, Нейбауера и др. Последние две камеры употребляются в Америке. (В каталоге Arthur Thomas C° К» 3300 и 3318.) К. с. для счета форменных элемент тов спинномозговой жидкости. Для этой цели употребляются камеры с большой поверхностью или с большой глу – бипой. К. с. Фукс-Розенталя (Fuchs, Rosenthal) устроена по типу К. с. Тома-Цейсса, отличается большей поверхностью сетки и большей глубиной. Глубина камеры Фукс-Розенталя—0,2
мм,
поверхность сетки—16
мм2,
объем—3,2
мм3.
Сетка разделена двойными линиями на 16 больших квадратов (рисунок 19); каждый большой квадрат разделен одинарными линиями на 16 Рисунок 12. малых квадратов. Камера изготовляется фирмой Цейсса.—К. с. Глаубермана (Glaubermann) представляет собой модификацию камеры Фукс-Розенталя, по конструкции близкую к типу камеры Бюркера; площадь сетки увеличена до 25 жи8.—К. с. Д у н г е р a (Dunger)—конструкция по типу камеры Тома-Цейсса. Глубина камеры— 0,1
мм,
площадь сетки—50
ммг,
объем—• 5 «ж8 (рис. 20). Центральная часть сетки состоит из 9 квадратов, анало-гичн. сетке Тюрка; центральная часть окруженадвумя рядами больших квадратов ; наружный ряд состоит из семи больших квадратов (сторона квадрата = 1
мм,
почему общая площадь = 49 лш2); для упрощения счета общая площадь сетки доведена до 50 лш2 добавлением двух линий вверху и внизу, высотой Vu
мм
и длиной 7
мм,
что составляет недостающий 1
мм2.
Изготовляется фирмой Цейсса. Центральная часть сетки может быть употреблена для обычных подсчетов элементов крови, сетка в целом—для счета лейкоцитов при значительной лейкопении, для счета форменных элементов спинномозговой жидкости, для счета эозинофилов, тучных Рисунок 13.
Рисунок 14.
клеток и для целей цитодиагностики.—М е – тодические указания для счета форменных элементов спинномозговой жидкости. Для счета в наиболее распространенной камере Фукс-Розенталя употребляются смесители для белых кровяных шариков. До метки
1
насасывается жидкость, служащая для разведения (4—5%-ная уксусная к-та, окрашенная метил-виолетом), до метки
11
—спин – номозговая жидкость, чем достигается разведение в Vio ■ Вычисление: если количество форменных элементов во всей камере
а,
то в 1
мм*
будет
Х=
^Л5 = ^ > что без осо_ бой ошибки заменяется делением полученного при подсчете элементов во всей камере числа на 3. Счет производится с окуляром № 4 и объективом № 5 микроскопа фирмы Рейхерта или соответствующими системами других фирм. К. с. для бактерий. Считать в камере можно только эмульсии однородных бактерий, не образующих кучек, нитей, цепочек и проч.; лучше это делать без всякой Ulllfci.»*!’^-:. ‘-b-^lllllll
им
- Ifffil
-.-_-=._ –
-=-»_ -; г=г_ ==-:
1(№^1,ч-_шш1 Рисунок 15. Рисунок 16. окраски, т. к. осадок краски мешает счету. Для счета можно пользоваться обыкновен-нымикамерами, напр. камерой Тома-Цейсса. Эмульсия бактерий после тщательного встряхивания разводится физиологич. раствором (0,85% NaCl) точно градуированными пипетками (Эрлиха) в 10—20 раз, если густота основной эмульсии приблизительно 1—2
Рисунок 17.
млрд. Из разведенной эмульсии после тщательного встряхивания берется капилярной пипеткой капля и наносится обычным порядком в камеру Тома-Цейсса. Подсчиты-вается не меньше 4 больших квадратов. Зная, что объем большого квадрата=1/гбо
мм3,
количество микробных тел в 1
см3
опреде – , ~
п. т.
250.1000 ______ ляется по формуле
X
=-, где
q
— число сосчитанных больших квадратов, и— число сосчитанных бактерий, m — кратность разведения. Счет производится с наибольшей сухой системой микроскопа ;употребление масляной системы невозможно вследствие толщины покровного стекла и глубины камеры. Глубина обычных камер очень затрудняет счет, т. к. микробы перемещаются вследствие молекулярного движения, располагаются в несколько слоев и долго не оседают. Для уменьшения молекулярного движения рекомендуете^ прибавлять 0,2—0,5% гуммиарабика или
Рисунок 18.
2%-ный раствор пептона.—В последнее время употребляют специальные, более мелкие камеры: К. Тома (Thoma) для бактерий из сплошного стекла; конструкция аналогична камере Леви с одинарной сеткой (рис. 10). Глубина камеры — 0,02 мм, сетка — типа Цапперта (рис. 7). Счет производится только в больших квадратах центральной части сетки, аналогично вышеприведенному. При вычислении количества микробов в 1 мм3 формулу нужно умножить на 5, т. к. объем данной камеры в 5 раз менынеобъемаобы-чной камеры То-ма-Цейсса и объем большого квадрата = Vl250 ММ3. - Трестера (Тгое – затемненном поле в окуляре. Для Рисунок 19. Счет в счетной камере ster) производится при зрения. Сетка находится каждого объектива нужно при помощи об-ективного микрометра определить величину сторон сетки. Найденное число при данной комбинации линз и данной длине тубуса микроскопа является величиной постоянной. Вычисление производится по формуле N = —^ , где а —длина стороны квадрата сетки в миллиметрах, Т —глубина камеры, и—среднее число микробов п !i= - г 11II Рисунок 20. в 1 квадратике. К. с. Гельбера (Helber) употребляется в конструкции, аналогичной камере Леви (рисунок 11) и камере Гаусера (рис. 14). Глубина камеры—0,02 мм. Сетка Нейбауера (рис. 13). Для камеры рекомендуется употребление особенно тонких покровных стекол—0,18 мм толщины, что дает возможность применять масляную систему. Последнее особенно удобно в камере Гау – сера благодаря фиксации покровного стекла зажимами. Камера выпущена американской фирмой Arthur Thomas Company Philadelphia. В каталоге Laboratory apparatus and reagents под № 3305—камера Гельбера в конструкции камеры Леви; К> 3323—в конструкции камеры Гаусера; покровные стекла—№ 3382.& л. Алексина. Лит.: Глаубермав Я., Клиническая гематология, ч. 1, М., 1917; ГоряевН., Исследование и симптоматология болезней крови (Основы клин. диагностики, под ред. А. Левина и Д. Плетнева, М.— Л., 1928); Предтеченский В., Руководство к клинической микроскопии, М., 1924; Klein W., Die Methoden der Keimzahlung (Hndb. d. pathog. Mi-kroorganismen, hrsg. v. W. Kolle, R. Kraus u. P. Uhlen-huth, Jena—Berlin—Wien, B. X, 1929, лит.).