ДИАЗОРЕАКЦИИ
Спасибо нашим инвесторам из казино онлайн
ДИАЗОРЕАКЦИИ
в том смысле, как этот термин употребляется в лабораторной практике, заключаются в образовании окрашенных продуктов в результате воздействия диазореактива на исследуемые вещества. Веществ, дающих соединения сдиазореакти-вом, известно много. Наиболее интересны из них те, к-рые обладают яркой окраской, зависящей от образующейся при реакции азогруппы —N=N—. К таким веществам относятся напр. ароматич. амины и фенолы. В клинику Д. введена в 1882г. Эрлихом, к-рый открыл способность мочи при нек-рых заболеваниях давать интенсивную окраску с ди-азореактивом (Д. Эрлиха). Для реакции нужны 2 раствора.
А
: 0,5%-ныЙ водный раствор азотистокислого натрия NaN02, хранящийся в темной склянке с притертой пробкой; время от времени должен приготовляться вновь, т. к. при стоянии портится.
В:о
%0-ный раствор сульфаниловой кислоты в разведенной соляной кислоте. Т. к. сульфаниловая кислота растворяется плохо, лучше всего растереть в ступке 5 з сульфаниловой к-ты с 50еж3 соляной к-ты (уд. вес 1,12) и постепенно долить водой до литра. Раствор отстаивается или фильтруется. Оба раствора сохраняются отдельно, и непосредственно перед производством реакции 5—10
см3
раствора
В
смешиваются с несколькими каплями раствора
А.
Происходит быстрое диазотирова-ние сульфаниловой кислоты в диазосуль-фоновую. Образующийся реактив носит название диазореактива или реактива Эр лиха. SOsH— C, H4—NHa (HC1) + NaNOa =
I
-
1
= SO,— C. H4—N + NaCU + 2H20. Ill N Избыток раствора
А
может вредить чувствительности (не должно быть запаха окислов азота после встряхивания). Д. в моче. К приготовленному таким образом диазореактиву приливается равновеликий объем мочи (приблизительно), и смесь подщелачивается аммиаком. Реакция считается положительной, если появляется красное окрашивание раствора и пены его [см. отдельную таблицу, рис. 6 (I и
II)].
При стоянии цвет часто бледнеет (сам диа-зореактив от прибавления аммиака принимает желтую окраску). Иногда после прили-вания кислого диазореактива к моче появляется яркожелтое окрашивание до под-щелачивания аммиаком. Эта желтая реакция Эрлиха (eigelbe primare Diazoreaktion) считается происходящей от уробилиногена, встречается при пневмонии и других б-нях, сопровождающихся выделением уробилиногена, и в клин, практику не вошла. Не получила распространения также и реакция Паули (Pauli; реактив +моча +сода). Д. не может быть проделана в желтушной моче, т. к. билирубин дает с диазореактивом темное красно-фиолетовое окрашивание, к-рое может служить доказательством присутст – вия билирубина, но не считается за положительную Д. Эрлиха в клин, смысле. Из лекарственных веществ алкалоиды, группа салициловой кислоты, антипирина, кофеина, а также и бензонафтол реакции не мешают. Приемы ортоформа и фенацетина вызывают красное окрашивание. Кетонурия красного окрашивания не дает, несмотря на то, что ацетоуксусная кислота реагирует с диазореактивом.—Не удалось еще выяснить, какое вещество появляется в моче при положительной Д. По хим. строению получающееся соединение должно соответствовать формуле: so3h—с„н4—n=n—r, где R — неизвестный радикал. Т. к. раствор его обладает интенсивной окраской, можно предположить, что диазосоединение сочетается с каким-то ароматическим или вообще циклически построенным телом, появляющимся в моче. Т.к. реакция ведется в аммиач-но-щелочной среде, это тело вероятно обладает свойствами амина или фенола. Мысль о том, что здесь имеет значение производное гистидина (заключающего в себе группу ими-дазола), не совсем убедительна, т. к. азо-соединения гистидиновых производных обладают другими свойствами. В некоторых случаях диазореакция Эрлиха повидимому обусловлена присутствием урохромогена и связана с реакцией Вейса, присущей этому телу (пожелтение мочи от прибавления нескольких капель раствора марганцовокислого калия). Вероятно существует несколько различных веществ, дающих диазореакцию Эрлиха. Удалось доказать, что иногда эти тела перегоняются с водяным паром, частью же связаны в виде эфиросерных кислот и освобождаются гидролизом. Эти данные говорят за фенольный характер их. Путем сложной обработки больших количеств нормальной мочи можно доказать, что ив ней имеются ничтожные следы дающих Д. веществ. Но типичная Д. в нормальной моче без предварительной обработки не наблюдается никогда. От питания, даже при умышленном кормлении тирозином и гистидином, реакция Эрлиха не зависит. В тяжелых случаях (тиф, tbc, менингит) с положительной Д. б-ные находятся в бессознательном состоянии и часто голодают.
Поэтому приходится думать о значении внутриклеточного эндогенного обмена для реакции Эрлиха. Происходящие от распада клеточного белка циклические соединения окисляются в боковых цепях, но кольцевые части ускользают от разрушения, и образовавшиеся тела типа моно – или полифенолов попадают в мочу и дают Д. Эрлиха. Интенсивность ее часто резко меняется в короткий срок. Клин, исследований о появлении Д. в моче сделано много. Чаще всего реакция наблюдается при лихорадочных заболеваниях. На первом месте стоит корь, при которой Д. не имеет дурного прогностического значения и появляется часто и в доброкачественных случаях. Напротив, при скарлатине Д. наблюдается редко и здесь свойственна более тяжелым формам. Все тифы, особенно брюшной и сыпной, могут дать положительную Д. Чем сильнее лихорадочные явления, тем резче обыкновенно выражена Д. Однако она даже и в тяжелых случаях может отсутствовать.
i f
*sff
3 6
line. L ii 2.
\\>Нокг\ио\ул\л
lmMosa licrcdiloria. Рис 3. DcnnaLltLS JicrpcLifonais Untiring. (Рисунок 1—3 из ГпеЬоеь’о.) Рисунок ‘I. /lt±ui t/ лихорадь^, Рис, – г]. Дуод^имьпин
сок:
^—* нормал ыпл1; 7/— дунд*: пильни и сок & ie|>ra 10 ыни. посте иасдеппн сирчокнелич Mflr-неэнн (нузирчни желчь); ///—дуоденальный сок спусти час после мрел идущего j печен очная желчь):
IV —
дуоденальный сок нрч чо.!нон закупорка желчных путев (reap, при ынсленнн? фнра)-панкрсатччсскнн сок. Рисунок В, / ч // — Лндоорелкпня Эрлнха а моче:
t ■
отрнтнэ тельная (пена желтан):
II—
положительная (пена к^рмпнокрнечан).
Iff
— положительна*! прямая дипзпреакпин MijHluiis v* el. burffh’n а кропи;
IV
и
V
—резко и умеренно положи гел ьиая непрямая днаэориакцнн llijinanb V, d. I V:\ i.»:i. К ст.
Денгс лихорадка, Диаэарсатиш, Дуоденальный зонО, Дюрита бояезнь, flpittfrmotyifs bfiiioSQ.
to» Время появления реакции различно, иногда она заметна уже к концу первой недели. Изменения яркости совпадают с улучшением и ухудшением состояния б-ного. При рецидивах пропавшая Д. появляется вновь. Туберкулез во всех своих проявлениях при высокой t° может дать Д. Предсказание этим омрачается, но не должно считаться безусловно дурным. Всевозможные септические процессы также вызывают реакцию Эрлиха. Реже она описывалась при высокой t°, зависящей от других инфекций (грип, ангина и т. д.). Указать такой тяжелый лихорадочный процесс, при котором Д. не может появиться никогда, едва ли возможно. Значительно менее характерна Д. для новообразований, б-ни Годжкина и т. д. Таким образом реакция Эрлиха не есть симптом одной какой-либо б-ни и для диагностики применима только при одновременном учете всех клин, и лабораторных данных. Больше значения она имеет для характеристики обмена веществ и оценки общего состояния б-ного. Во всех случаях продолжительного существования Д. имеется дело хотя и с поправимым, но глубоким и существенным пат. уклонением обмена, и положительная диазореакция всегда говорит о некоторой тяжести болезненного процесса (кроме легких случаев кори). е. Фромгольд. Диазореакция в крови служит для определения в ней билирубина. Еще в 1883 г. Эр-лих указал на характерное красно-фиолетовое окрашивание, к-рое дает диазореактив с билирубином; Прёшеру (Proscher) в 1900 г. удалось доказать, что оно зависит от образования азобилирубина. В клин, практику для определения билирубина крови Д. была введена лишь в 1913 г. Гиманс ван ден Бергом (Hijmans v. d. Bergh), имя к-рого она в данное время и носит. Благодаря своей простоте и высокой чувствительности (открывает билирубин в разведении 1:1.500.000) она пользуется в наст, время наибольшим распространением сравнительно с другими реакциями для определения билирубина крови. Она пригодна не только для качественного, но и для количественного его определения. Для качественного определения может служить т. н. «прямая реакция» Г. ван ден Берга: к 1
см3
сыворотки—цельной или разведенной в зависимости от степени желтушности—прибавляют х/4—
1/t
объема реактива Эрлиха; быстро наступает красно-фиолетовое окрашивание раствора. Для контроля его сравнивают при падающем дневном свете на белом фоне с соответственно разведенной сывороткой без диазо-реактива. В ‘Зависимости от быстроты наступления окраски различают: 1) быструю прямую реакцию [см. отдельную таблицу, рис. 6
(III)]
—окраска появляется немедленно, maximum ее интенсивности не позже 30 секунд с момента прибавления реактива; такой тип реакции дает, по ван ден Бергу, билирубин, уже выделенный печенью в желчь и при застое последней вновь всосавшийся в ток крови («застойный билирубин» Lepehne); 2) замедленную прямую реакцию—начало реакции через 2—4 мин. и позднее; ее дает, по ван ден Бергу, билирубин, еще не прошедший печени (билирубин крови при гемолитической желтухе, злокачественном малокровии и т. п., «функцио нальный билирубин» Lepehne). Между этими типами существуют переходы—т. н. двухфазная прямая реакция: быстрое появление начала окраски с последующим ее усилением.—Для количеств, определения билирубина по ван ден Бергу пользуются обычно так назыв. «непрямой реакцией»: к 2
см3
алкоголя (96%) в пробирке центрифуги приливают
1 см3
цельной или разведенной (в зависимости от степени желтушности) сыворотки, не содержащей растворенного вследствие гемолиза гемоглобина; центрифугируют, отсасывают 1
см3
жидкости, находящейся поверх свернувшегося осевшего белка, прибавляют 0,25
г
свеже приготовленного диазореактива, выжидают 2—3 мин. максимума реакции и подвергают исследованию в колориметре Аутенрита (Autenrieth) [см. отдельную таблицу, рис. 6