БАКТЕРИОФАГИЯ
Спасибо нашим инвесторам из казино онлайн
БАКТЕРИОФАГИЯ
, процесс растворения бактерий агентом невыясненной природы. В 1915 г. явление Б. было обнаружено Туор-том (Twort) в посевах белого стафилококка из оспенной вакцины. Название—«бактериофаг» и подробное описание свойств его было дано д’Эреллем (d ‘Herelle), получившим его в 1918 г. из испражнении выздоравливающего от дизентерии. Под влиянием бактериофага уже через 30 мин. среди нормально красящихся бактерий обнаруживаются слабо окрашенные экземпляры; через 45 мин. число последних возрастает и через 2 часа лишь немногие микробы красятся нормально, вся же остальная масса их превращается в зернышки, аморфные клубочки и, наконец,-в шарообразные формы; через 4 часа—полное растворение. При посеве на твердые среды культуры, содержащей бактериофагов, появляются колонии с неровными, как бы изъеденными, краями или с просветленным центром; среди сплошного роста отмечаются стерильные участки. Д’Эрелль считает эти участки негативными колониями бактериофагов. Если коснуться петлей подобного участка и перенести ее в свежие питательные среды, то изменение бактерий в них обнаруживается снова. Такие «перевивки» можно продолжать до бесконечности, при чем лизис становится все более активным. Весь процесс носит назва – ние бактериофагии, или феномена Туорт-д’Эрелля. Бактериофаг в природе весьма распространен. Его находят в почве, в старых лабораторных культурах, в речной, колодезной и морской воде, в сточных водах, испражнениях больных и здоровых людей и, гл. обр., у выздоравливающих.— Метод получения. 1—2
г
оформленных каловых масс растирают в 2—■ 2х/8
кУб – см
физиол. раствора и переносят в 100
куб. см
мясного бульона. Жидкие фекальные массы перед посевом разбавляют в 2—3 раза физиологическим раствором. Одновременно делается посев на чашки Петри. Через 18—20 часов пребывания в термостате при 37° культура фильтруется через свечу Шамберлана (Chamberland) или Бер-кефельда (Berkefeld); фильтрат исследуется на присутствие бактериофагов. Пользуясь видоизмененным методом д’Эрелля, 0,1
куб. см
фильтрата прибавляют к одновременно засеваемому соответств. микробом бульону. Через 18 — 20 часов исследуются результаты. В зависимости от активности бактериофагов может наступить или полное растворение—бульон прозрачен, или частичное растворение—бульон слегка мутный. В последнем случае делают посев на чашки и определяют присутствие бактериофагов по наличию стерильных участков или анормальных колоний. Дёрр, Отто, Байль (Doerr, Otto, Bail) пользуются этим методом, не прибегая к предварительному посеву в бульон. Чашки засеваются соответствующей культурой. Спустя 5—10 мин. наносят каплю фильтрата в центр засеянного участка; наклоняя чашку, дают капле стечь. Через 18—20 часов исследуются результаты. Присутствие стерильных участков на месте капли среди сплошного бактерийного роста дает основание для положительного ответа. Обнаружив присутствие бактериофагов, определяют их активность путем титрования. Титрование по способу А п-пельмана. В серии пробирок фильтрат разводится от 1:10 до 1:10_в (одна миллиардная); 0,1
куб. см
каждого разведения прибавляется к свежезасеянному бульону. Наибольшее разведение, при котором бульон остается прозрачным, принимается за титр бактериофагов. Отто титрует бактериофагов на чашках, нанося по капле из различных разведений. Наличие хотя бы одной анормальной колонии или стерильного участка определяет титр бактериофагов. Прозрачный бульон, в к-ром произошло растворение бактерий, через 1—2 суток может помутнеть вследствие появления т. н. «вторичных» культур, устойчивых («лизо-резистентных») к бактериофагам. Биологич. свойства этих культур резко отличаются от материнского штамма. Они теряют способность агглютинироваться в специфической сыворотке, становятся более вирулентными, дают уродливые полиморфные гигантские формы, утрачивают способность • газообразования и т. д. Действие бактериофагов связано с целым рядом условий: кислая реакция питательной среды, отсутствие диссоциированных солей, значительная вязкость среды, нек-рые хим. агенты (тетралин, хинин и его соли и др.) понижают активность бактериофагов или совсем разрушают их. В запаянных ампулах активность бактериофага сохраняется годами; при доступе воздуха он разрушается в 6 недель. Подвергаясь солнечным лучам или рассеянному свету, бактериофаг погибает в течение 2— 3 дней. Устойчивость к нагреванию зависит от индивидуальности типа бактериофагов; по Дёрру и Отто, инактивация бактериофагов наступает в предел
ах 58—75°. Ин-активированному бактериофагу последовательными пассажами с соответствующей культурой микробов можно вернуть активность. По данным Одюруа (Hauduroy), бактериофаг разрушается лишь при 102° во влажной среде и при 135° в высушенном состоянии. Оптимальный срок образования бактериофага от 3 до 18 часов, температурный оптимум 37°. При t° ниже 8° и выше 46° образование бактериофагов прекращается. Образование бактериофага и его активность находятся в зависимости от количественных соотношений с бактериями. Лучше всего бактериофаг развивается при рН=7,6—7,8. Прибавление желатины, агара, камеди, яичного белка и др. коллоидов тормозит действие бактериофага; он энергично адсорбируется электроотрицательными коллоидами (кремнистая накипь, каолин) и плохо—электроположительными. Бактериофаг капиллярно активен: прибавленный к жидкому агару, после застывания последнего, дифундирует на его поверхность, проходит через тонкие коллоидные мешочки и мембраны, пропускающие протеины. На основании проходимости бактериофага через фильтры различной пористости величина его определяется равной частице колларгола (20—35 тяц). Из фильтрата бактериофаг может быть осажден центрифугированием, сернокислым аммонием и алкоголем. Бактериофаг вызывает в животном организме образование т. н. антител против себя и против соответствующего вида бактерий (бактериолизины, агглютинины, антитоксины). Антибактериофагная сыворотка задеряшвает бактериофагию, но не разрушает бактериофага.—Б. играет, несомненно, какую-то роль в иммунитете, инфекции и развитии эпидемии. Однако, эта роль в достаточной степени не выяснена. Терапевтич. значение бактериофага. Д’Эрелль описывает 7 случаев тяжелой дизентерии и 4 случая бубонной чумы, излеченных введением бактериофагов; да Кбста Круц (da Costa Kruz) сообщает о применении бактериофага per os в 10.000 случаев дизентерии—тоже с хорошими результатами. Одюруа успешно лечил бактериофагами брюшной тиф, Грациа (Gratia) и др.—стафилококковые заболевания. Другие авторы (Otto, Winkler, Meissner), при лечении бактериофагами тех же б-ней, не видели хороших результатов. При повторном впрыскивании бактериофагов в организм животного, сыворотка последнего легко приобретает антибактериофагические свойства, возникают лизорезистентные формы бактерий, что, по мнению некоторых авторов, делает применение бактериофагов небезопасным для инфицированного организма. • О природе бактериофага существует целый ряд мнений, объединяющихся вокруг трех теорий: 1) теории ультрамикроскопического вируса д ‘Эрелля, 2) теории аутолиза Борде, и Сиука (Bordet et Ciuca) и 3) ферментной теории Отто и Мун-тера (Munter). На основании бесконечной перевиваемости бактериофагов, усиления «вирулентности» при пассажах, приспособляемости к вредным агентам, широкого распространения в природе и ряда других свойств, присущих живому организму, д’Эрелль считает бактериофаг микробным паразитом. Взгляд этот поддерживают Пра-усниц (Prausnitz), Элиава, Ашешов (Ashe-show), Рейхерт (Reichert). Борде и Сиука рассматривают Б. как результат наслед – : ственного заболевания бактерий, возникающего на почве нарушения равновесия ас – : симиляции и обмена. Отто и Мунтер считают, что бактериофаг происходит из самих бактерий, распадающихся на коллоидальные частицы с ферментативной способностью. Подкрепление своей теории авторы видят в опытах Эренберга (Ehrenberg), которому удавалось размножать белковые ферменты, фильтруя их через бактериальные фильтры, и развивать в них специфичность. Гамалея считает, что явление Б. связано с действием гормона деления бактерий—«кластина». В известных случаях кла-стин вырабатывается в избытке—бактерии расщепляются и переходят в фильтрующиеся формы; при посевах в фильтрате кластин переносится в свежие порции, явление расщепления наступает вновь и т. д.
Лит.:
Одюруа П., Учение о бактериофаге, Л., 1927; Д’Эрелль Ф., Бактериофаг, М.—Л., 1926; Bordet J., Comptes rendus de la societe biolo-gique, v. XC, 1924, v. XCIII, 1925; Annales de l’lnst. Pasteur, 1925, № 9; О 11 о R., Munter H. u. Winkler W., Zeitschrift f. Hyg. u. Infektionskr., B. XCVI, 1922; О 11 о R. u. Munter H., Ibid., B. XCVIII, 1922; Bordet J. et Ciuca M., Comptes rendus de la societe biologique, v. LXXXIII— LXXXVII, 1920—1922. С. Клюхин.